BCA蛋白定量试剂盒说明书
产品货号：PA23228
产品规格：微孔板法（2500次）比色皿法（250次）
| 试剂盒组成 | 规格 | 数量 |
| BCA Protein Assay Reagent A | 250ml | 2 |
| BCA Protein Assay Reagent B | 10ml | 2 |
| BSA Standard (2mg/ml) | 1ml | 2 |
| 说明书 | 份 | 1 |
注：储存温度: 室温
注意: 试剂盒处于低温或长期保存过程中，Reagent A和Reagent B可能会产生沉淀，可以通过加热的方式使沉淀溶解。如果发现有微生物污染，请立即丢弃试剂盒。
一．标准品和WR工作液的配置：
1. 不同浓度BSA标准品制备
根据表1所示，在干净的管中配置一套BSA蛋白标准品。
表1 不同浓度BSA标准品配置方法
| 编号 | 稀释液体积 | BSA体积 | BSA终浓度 |
| A | 0 | 300μl原液 | 2000μg/ml |
| B | 125μl | 375μl原液 | 1500μg/ml |
| C | 325μl | 325μl原液 | 1000μg/ml |
| D | 175μl | 175μl稀释液B | 750μg/ml |
| E | 325μl | 325μl稀释液C | 500μg/ml |
| F | 325μl | 325μl稀释液E | 250μg/ml |
| G | 325μl | 325μl稀释液F | 125μg/ml |
| H | 400μl | 100μl稀释液G | 25μg/ml |
| I | 400μl | 0 | 0μg/ml=Blank |
*稀释液为去离子水
2. BCA工作液（WR）的配置
用下面公式计算每次实验所需WR体积：
（#标准品+#待测样品）×（#平行样）×（每个样品所需WR体积）=所需WR体积
注：用比色皿测试待测样品时，每个样品需要2.0ml的WR；用微孔板测试待测样品时，每个样品需要200μl的WR。
WR液的配置，将50份的Reagent A与1份的Reagent B混合，配置成WR。
注：当Reagent B加入到Reagent A后，溶液会出现浑浊，混匀后浑浊会立即消失并变成绿色澄清液体，WR能够在室温密保容器中稳定保存几天。
比色皿法测定蛋白浓度标准方法（样品和WR工作液比率=1：20），操作流程如图1所示：
吸取0.1ml的待测样品或者标准品加入到比色皿中；
加2ml的WR工作液到含有待测样品或标准品的比色皿中混匀；
加上盖子，将比色皿置于37摄氏度中抚育30分钟；
冷却到室温；
将分光光度计波长调整至562nm，用去离子水将仪器归零，然后测量所有样品的光吸收值（在10分钟内完成）；
标准品和待测样品的光吸收值应该同时减去标准品I（Blank）的吸收值；
绘制标准曲线，标准曲线的横坐标是标准品的蛋白质浓度，纵坐标是标准品的OD562的光吸收值；使用标准曲线去计算待测样品的蛋白质浓度；
图1：比色皿法测量蛋白质浓度流程图
三.微孔板法检测蛋白质浓度流程（待测样品与WR工作液的比率=1：8）
吸取25μl的标准品或者待测样品分别加入到96孔板中；
加200μl的WR工作液到每个待测样品或者标准品中，震荡30s;
盖上盖子37摄氏度抚育30分钟；
冷却到室温；
用酶标仪或者微孔板读板机测量562nm的光吸收（波长540-590nm均可接受，如果使用高于562nm的波长测量，抚育时间提高至2小时）；
标准品和待测样品的值应该同时减去标准品I（Blank）的吸收值；
绘制标准曲线，标准曲线的横坐标是标准品的蛋白质浓度，纵坐标是标准品的OD562的光吸收值；使用标准曲线去计算待测样品的蛋白质浓度；